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异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 |
| CAS No.: |
367-93-1 |
| 分子式： |
C9H18O5S |
| 分子量： |
238.3 |
| 备注： |
中文名称异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷中文同义词ISOPROPYL尾-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE;异丙基-Β-D-硫代半乳糖苷/异丙基-Β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷/1-甲基乙基-Β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷;异丙基-B-D-硫代半乳糖苷1G;甲基-BETA-D-半乳糖苷;IPTG异丙基-Β-D-硫代半乳糖苷;异丙基Β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷IPTG;异丙基硫代-Β-D-半乳糖苷(IPTG);异丙基-Β-D-硫代半乳糖苷(简称IPTG)英文名称IPTG英文同义词POLYETYLENEGLYCOL6000MOL.BIOLOGYGRA;SULPHURICACID0,01MOL/L0,02N;YPDBROTHE;Isopropyl2,3-O-isopropylidene-4-O-benzoyl-β-L-thiorhamnopyranoside;IPTG(Isopropyl-β-D-thiogalatopyranoside);1-ISOPROPYL-BETA-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE;isopropyl-thiogalactopyranoside;1-methylethyl1-thio-.beta.-D-GalactopyranosideCAS号367-93-1分子式C9H18O5S分子量238.3EINECS号206-703-0相关类别微生物;定制合成产品;原料药;化学原药;糖类;医药原料;原料;生物化工;基因工程蛋白生产诱导剂;基因组学和分子诊断;生物化学;蛋白质组学;安慰性诱导物;诱导剂;糖苷系列;常用试剂;其它生化试剂;试剂;MBI产品;自主产品;化妆品原料;基因工程菌诱导剂;优势产品;化学试剂;特色原料;中间体;有机原料;辅酶;生化试剂-碳水化合物类;其他化工产品;化工中间体;植物提取物;常用糖合成中间体;分子生物学-即用型溶液;分子生物试剂-核酸相关;化工产品-有机化工;其他原料;医药原料药-科研原料;黄金产品;糖类（碳水化合物）;Intermediates中间体;检测，显色，标记试剂;Substrates;13C&2HSugars;Biochemistry;Galactose;Glycosides;Sugars;Thioglycosides;Enzymesubstrates;Carbohydrates&Derivatives;Carbohydrates;单糖;检测标志试剂;生化试剂;酶底物;糖类化合物;医药中间体;substrate;其他生化试剂;Imidazolines/Imidazolidines,Imidazoles,HeterocyclicAcids;糖类化合物/单糖;食品添加剂;碳水化合物类;碳水化合物;标准品-标准滴定溶液;生化试剂-蛋白质;试剂类;化学试剂;化工原料;自有品牌试剂;精细化工原料;其它;保健品原料;医药化工类;检测标记显色;通用生化试剂-糖类;科研试剂;生物缓冲剂;其他;化工中间体Mol文件367-93-1.mol结构式异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷性质熔点105°C比旋光度-31º(c=1,water)沸点350.9°C(roughestimate)密度1.3329(roughestimate)折射率1.5060(estimate)储存条件2-8°C溶解度溶于水或甲醇。酸度系数(pKa)13.00±0.70(Predicted)形态结晶粉末颜色白色水溶解性solubleMerck14,5082BRN4631稳定性稳定的。与强氧化剂不相容。InChIKeyBPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-NCAS数据库367-93-1(CASDataBaseReference)EPA化学物质信息Isopropyl.beta.-thiogalactoside(367-93-1)异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷用途与合成方法概述异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。IPTG常用于需要诱导β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与X-Gal或Bluo-Gal结合使用，用于重组细菌菌落的蓝白筛选，这些菌落可以诱导lac操纵子在大肠杆菌中的表达。IPTG与lacI阻遏蛋白结合并改变其构象而发挥作用，防止β-半乳糖苷酶编码基因lacZ的抑制。诱导原理E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达。在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被Chemicalbook诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经β-半乳糖苷酶催化，转变为异乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用与异乳糖相同，是一种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。IPTG的优点1.能诱导酶的合成，但又不被分解的分子，称为安慰诱导物。由于乳糖虽可诱导酶的合成，但又随之分解，产生很多复杂的动力学问题，因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。2.IPTG不被菌体代谢，为乳糖类似物，一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果，所以IPTG的诱导效率高，往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢，在胞内专一诱导外源蛋白的表达。不受细胞代谢的影响，诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用，既能做为诱导剂异乳糖的前体物质，又可以做碳源，在诱导过程中，很不稳定，IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用。3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。4.半乳糖苷键中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同，IPTG虽不为β–半乳糖苷酶所识别，但它是lac基因簇十分有效的诱导物。使用方法：首先把IPTG配制成23.83mg/ml(100mM)的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然后在100ml的琼脂培养基中，加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal(20mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100μl的Amp(100mg/ml)，制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当dna片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体)，然后转化至lacZ缺失细胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。实验材料的准备1、诱导表达材料：(1)LB(Luria—Bertani))培养基：酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl10g琼脂(Agar)1-2%蒸馏水(Distilledwater)1000mlpH7.0适用范围：大肠杆菌(2)IPTG贮备液：2gIPTG溶于10mL蒸馏水中,0.22μm滤膜过滤除菌,分装成1mL/份,-20℃保存.(3)l×凝胶电泳加样缓冲液：50mmol/LTris-CI(pH6.8)50mmol/LDTT2%SDS(电泳级)0.1%溴酚蓝10%甘油2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白纯化材料：1)酶溶法(1)裂解缓冲液：50mmol/LTris-CI(pH8.0)1mmol/LEDTA100mmol/LNaCI(2)50mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF).(3)10mg/mL溶菌酶.(4)脱氧胆酸.(5)1mg/mLDNaseI.2)超声破碎法(1)TE缓冲液.(2)2×SDS-PAGE凝胶电泳加样缓冲液：100mmol/LTris-HCI(pH8.0)100mmol/LDTT4%SDS0.2%溴酚蓝20%甘油实验方案1、外源基因的诱导表达：(1)用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA和目的基因.(2)按连接步骤连接目的基因和载体,并转化到相应的宿主菌.(3)筛选出含重组子的转化菌落,提取质粒DNA作限制性内切核酸酶图谱,DNA序列测定,确定无误后进行下一步.(4)如果表达载体的原核启动子为PL启动子,则在30-32℃培养数小时,使培养液的OD600达0.4-0.6,迅速使温度升至42℃继续培养3-5h;如果表达载体的原核启动子为tac等,则37℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG至终浓度为1mmol/L.继续培养3-5h.(5)取上述培养液1mL,1000g离心,1min,沉淀,加100μL聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后,作SDS-PAGE检测.2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化：细菌的裂解常用方法有：①高温珠磨法;②高压匀浆;③超声破碎法;④酶溶法;⑤化学渗透等.前三种方法属机械破碎法,并且方法①、②已在工业生产中得到应用,后三种方法在实验室研究中应用较为广泛.下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤.酶溶法.常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3-葡聚糖酶;β-1,6-葡聚糖酶;蛋白酶;壳多糖酶;糖昔酶等.溶菌酶主要对细菌类有作用,而其他几种酶对酵母作用显著.主要步骤为：4℃,5000rpm离心,15min,收集诱导表达的细菌培养液(100mL).弃上清,约每克湿菌加3mL裂解缓冲液,悬浮沉淀.用途常用分子生物学试剂，常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等用途是β-半乳糖苷酶和β-半乳糖透酶的诱导剂，不被β-半乳糖苷水解，是硫代半乳糖转酰酶的底物用途IPTG常用于需要诱导β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与X-Gal或Bluo-Gal结合使用，用于重组细菌菌落的蓝白筛选，这些菌落可以诱导lac操纵子在大肠杆菌中的表达。IPTG与lacI阻遏蛋白结合并改变其构象而发挥作用，防止β-半乳糖苷酶编码基因lacZ的抑制。 |
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