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肌苷酸二钠 |
| CAS No.: |
4691-65-0 |
| 分子式： |
C10H11N4Na2O8P |
| 分子量： |
392.17 |
| 备注： |
中文名称肌苷酸二钠中文同义词肌甙酸二钠;肌苷酸二钠;DISODIUM5’-INOSINATE5’-肌苷酸二钠;肌苷酸二钠盐;肌苷单磷酸二钠盐;次黄苷-5’-磷酸二钠盐(+4℃);肌苷-5’-单磷酸二钠;肌苷酸二钠,次黄苷-5’-单磷酸盐英文名称Disodium5’-Inosinate英文同义词Disodium5’-IMP;Disodium9-[(2R,3R,4R,5R)-3,4-dihydroxy-5-(phosphonatooxymethyl)oxolan-2-yl]-3H-purin-6-one;disodiuminosine5’-phosphate;INOSICACIDDISODIUMSALT;IMPSODIUMSALT;IMP,NA2;IMPDISODIUMSALT;IMP2NACAS号4691-65-0分子式C10H14N4NaO8P分子量372.21EINECS号225-146-4相关类别增味剂;有机原料;酯;饲料添加剂;诱食剂和增香剂;嘧啶核苷酸;其他生化试剂;对照品;化工原料;生化试剂-植物激素及核酸类;核苷酸及其衍生物;核酸类;Biochemistry;Nucleosides,Nucleotides&RelatedReagents;Nucleotidesandtheiranalogs;调味剂;调味剂（风味增强剂）;食品添加剂;生物化学品;原料;中药对照品;有机化工原料;有机化学;体外诊断试剂;诊断试剂系列-诊断试剂系列;通用生化试剂-核酸;生物试剂;化工原料Mol文件4691-65-0.mol结构式肌苷酸二钠性质熔点175°CFEMA3669|DISODIUM5-INOSINATE储存条件2-8°C形态结晶粉末颜色白色气味(Odor)无味稳定性稳定的。与强氧化剂不相容。LogP-1.02CAS数据库4691-65-0(CASDataBaseReference)EPA化学物质信息5’-Inosinicacid,disodiumsalt(4691-65-0)肌苷酸二钠用途与合成方法性状白色粉末性质肌苷酸二钠为无色至白色结晶，或白色结晶性粉末，含约7.5分子结晶水，不吸湿，40℃开始失去结晶水，120℃以上成无水物。味鲜，鲜味阈值为0.025g/100mL，鲜味强度低于鸟苷酸钠，但二者并用有显著的协同作用。当二者以1:1混合时，鲜味阀值可降至0.0063%。与0.8%谷氨酸钠并用，其鲜味阀值更进一步降至0.000031%。溶于水，水溶液稳定，呈中性。在酸性溶液中加热易分解，失去呈味力。亦可被磷酸酶分解破坏。微溶于乙醇，几乎不溶于乙醚。用途肌苷酸二钠作为增味剂，营养添加剂鉴别试验紫外吸光度用0.01mol/L盐酸配制1/50000试样液，该溶液在波长250nm±2nm处有最大吸收值。A250/A260为1.55～1.65，A280／A260为0.2～0.3。核糖试验及有机磷酸盐试验均阳性，方法同“02006，5L鸟苷酸二钠”。钠盐反应阳性(IT-28)。溶解性溶于水，微溶于乙醇，几乎不溶于乙醚。．含量分析准确称取试样约500mg，移入1000ml容量瓶内，用0.01mol/L盐酸溶解后定容，混合。取此溶液10.0ml移入250ml容量瓶中，以0.01mol/L盐酸定容，混合。用0.01mol/L盐酸液作为对照样，在波长250nin处测吸光度(A)，液层宽1crn。试样中肌苷酸二钠(C10H11N4Na2O8P)的含量按下式计算：肌苷酸二钠含量(%)=A/310×25000/试样量（mg）×100/(100-水分（%）)×100毒性ADI不作特殊规定(FAO／WHO，2001)。LD5014.4g/kg(大鼠，经口)。0.1%～1.0%饲料量慢性试验饲养大鼠6个月后，体重增加，血浆、肝、肾、脾、睾丸、心、肺等重量及组织均无异常现象。安全性高。可安全用于食品(FDA，§172.535，2000)。EEC—HACSG规定不得用于婴幼儿食品。使用限量GB2760—96：各类食品，以GMP为限。FAO/WHO(1994)：午餐肉、火腿、咸肉等肉类化学性质无色至白色结晶，或白色结晶性粉末。平均含7.5个分子的结晶水。无臭，有特殊滋味。味觉阈值0.012%。不潮解。熔点不明显，180℃时呈褐色，230℃左右时分解。性稳定，在一般食品加工条件下(Ph值为4～7)、100℃加热1h无分解现象。与L-谷氨酸钠对鲜味有相乘效应(如以肌苷酸钠与L-谷氨酸钠之比为1：7，即有明显增强鲜味的效果)。其盐酸溶液的最大吸收波长为250nm士2nm。遇动植物中磷酸酯酶可分解而失去鲜味。44℃开始失去结晶水，120℃以上成无水物。易溶于水(13g/100ml，20℃)，水溶液呈中性，微溶于乙醇，几乎不溶于乙醚。天然品存在于鲔鱼等中。用途鲜味剂。如在酱油中加入5～10万分之一，即呈特殊鲜味。一般均与味精、鸟苷酸钠等合用，以提高增鲜效果。用途肌苷酸钠液时国内外允许使用的呈味剂，较少单独应用，常与味精一起混合使用，混用时鲜味有相乘的作用。我国规定可用于各类饲料、食品添加剂，按生产需要适量使用。用途肌苷酸钠也是国内外允许使用的呈味剂，单独应用较少，常与味精混合一起使用，混用时鲜味有相乘的作用。我国规定可用于各类食品，按生产需要适量使用。用途主要用于各种原因引起的白细胞减少和急慢性肝病。生产方法方法一、肌苷酸脱磷酸法肌苷酸二钠的制备棒状杆菌269发酵，发酵液去菌体，吸附，洗脱，浓缩，加乙醇，pH7-7.5条件下结晶可得肌苷酸二钠。棒状杆菌269[发酵]→发酵液[去菌体，吸附，洗脱，浓缩]→浓缩液[乙醇]→[pH7-7.5]肌苷酸二钠肌苷粗品的制备在乙酸缓冲液中，调pH5.4-5.6，加压137-147kPa，脱磷酸5h，可得肌苷粗品。肌苷酸二钠[乙酸，加压]→肌苷精制蒸馏水溶解，pH=6，重结晶，可得精品。方法二、一步发酵法菌株选育变异芽孢杆菌7171-9-1移接到斜面培养基上，30-32℃培养48h。斜面培养基成分为葡萄糖1%，蛋白胨0.4%，酵母浸膏0.7%，牛肉浸膏1.4%，琼脂2%，在pH7、120℃灭菌20min。变异芽孢杆菌7171-9-1[斜面培养]→[30-32℃,48h]菌种斜面种子培养一级种子：培养基成分为葡萄糖2%，蛋白胨1%，酵母浸膏1%，玉米浆0.5%，尿素0.5%，氯化钠0.25%。灭菌前pH7，用1L三角瓶装150ml培养基，115℃灭菌15min。每个三角瓶中接入白金耳环菌苔，在往复式摇床上，32℃±1℃培养18h。二级种子：培养基同一级种子，放大50L发酵罐，定容体积25L，接种量3%，32℃±1℃培养12-15h，搅拌速度320r/min，通风量1：0.25V/(V·min)，生长菌指标A(650nm)=0.78，pH=6.4-6.6。菌种斜面[摇床振荡]→[pH7,32℃±1℃,18h]一级种子培养液[50L发酵罐]→[pH6.4-6.6,32℃±1℃,12-15h]二级种子培养液发酵50L不锈钢标准发酵罐，定容体积35L。培养基成分为淀粉水解糖10Chemicalbook%，干酵母水解液1.5%，豆饼水解液0.5%，尿素0.4%，硫酸镁0.1%，氯化钾0.2%，磷酸氢二钠0.5%，硫酸铵1.5%，有机硅油0.05%。pH=7，接种量0.9%，32℃±1℃培养93h，搅拌速度320r/min，通风量1：0.5V/(V·min)。500L发酵罐，定容体积350L。培养基成分为淀粉水解糖10%，干酵母水解液1.5%，豆饼水解液0.5%，硫酸铵1.5%，硫酸镁0.1%，氯化钾0.2%，磷酸氢二钠0.5%，碳酸钙1%，有机硅油小于0.3%。pH=7，接种量7%，32℃±1℃培养75h，搅拌速度230r/min，通风量1：0.25V/(V·min)。20000L发酵罐，培养基同上，接种量2.5%,35℃±5℃培养83h。二级种子培养液[50L发酵罐]→[pH7,32℃±1℃,93h]发酵液[500L发酵罐]→[pH7,32℃±1℃,75h]发酵液[20000L发酵罐]→[pH7,35℃±1℃,83h]发酵液提取、吸附、洗脱将发酵液30-40L调pH=2.5-3，连同菌体通过2个串联的3.5kg732H树脂柱吸附。用相当于树脂总体积3倍的pH3水洗1次，把两柱分开，用pH3水把肌苷洗脱下来，再经769活性炭柱吸附肌苷，先用2-3倍体积的水洗涤，再用70-80℃水洗，70-80℃，1mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min，最后用0.01mol/L氢氧化钠溶液洗脱肌苷，收集洗脱液，真空浓缩，pH11或6放置，过滤，得粗品。发酵液[732树脂柱]→[pH2.5-3]吸附物[水]→[pH2.5-3]洗脱液[769活性炭柱]→吸附物[蒸馏水，氢氧化钠]→[70-80℃][氢氧化钠]→[70-80℃]洗脱液[浓缩结晶]→[pH11或6]肌苷粗品精制将粗品配成5%-10%的溶液，加热溶解，抽滤，冷却，过滤，少量水洗，烘干，即得肌苷精制品。肌苷粗品[蒸馏水]→[重结晶]肌苷成品。生产方法核糖核酸(RNA)水解法细胞中含有核糖核酸和脱氧核糖核酸(DNA)，而RNA水解可得4种核苷酸：腺苷酸、鸟苷酸、胞苷酸和尿苷酸，其中鸟苷酸和由腺苷酸转化而来的肌苷酸是呈味物质。核苷酸有2’-核苷酸、3’-核苷酸和5’-核苷酸，其中只有5’-核苷酸即5’-鸟苷酸和5’-肌苷酸具有呈味性能。RNA的提取常以RNA含量较高的酵母(最为常用)和白地霉细胞(含RNA4～11%)为原料，采用稀碱液抽提。将酵母干细胞用水配成5%～10%的悬浮液，加入氢氧化钠使其质量分数达1%；在20℃下搅拌30～45min，再用6mol/L的盐酸中和至Ph=7.0；加热至900c时保温10min，以杀灭霉菌，再冷却至2~4℃静置2～3d；取上层清液用6mol/L的盐酸调Ph值至2.5(RNA等电点)，在2~4℃静置过夜；过滤得RNA，并用乙醇洗涤、干燥得RNA含量60%～70%的产品，产率4%～5%。酵母细胞也可在6%、8%的盐酸中浸提。RNA水解在30℃下将橘青霉菌ThoM的紫外线变异株N-10-14用麸皮培养5d，用90L的水抽提50kg的曲，得89L含有强力核酸酶P1(5’-磷酸二酯酶)的抽提液；将400mL酶液加入10L0.8%的RNA溶液中，调Ph值为5.6，并在65℃下反应2h，得混合核苷酸(腺苷酸0.22%、鸟苷酸0.19%、尿苷酸0.18%和胞苷酸0．14%)。核苷酸的分离利用各种核苷酸具有不同的等电点，用强碱性阴离子交换树脂来分离。将上述核苷酸混合液调Ph值至8，用国产717树脂上柱吸附，再依次用0.02mol/L甲酸、0.15mol/L甲酸、0.01mol/L甲酸-0.05mo1/LI甲酸钠和0.1mol/L甲酸-0.1mol/L甲酸钠洗脱，分别得到胞苷酸、腺苷酸、尿苷酸和鸟苷酸。从腺苷酸制备肌苷酸钠在30℃下用麸皮培养米曲霉48h，加10倍的水浸泡3h，得脱氨酶液；在腺苷酸液中加入10%的脱氨酶液，并在50～60℃和Ph=6下反应3h；加热至100℃以杀酶，过滤，取清液真空浓缩、结晶得产品肌苷酸二钠。发酵法生产5L肌苷酸钠生产中主要采用的发酵法为葡萄糖直接发酵法，或葡萄糖发酵生产肌苷，再磷酸化生成肌苷酸。直接发酵法——一步法以葡萄糖为碳源，异变株或产氨短杆菌为生产菌，直接发酵生产肌苷酸。二步法以60～70g/L的葡萄糖为碳源，以枯草芽孢杆菌为生产菌，在30～32℃、Ph=5～7下发酵80h生产肌苷；肌苷再与磷酸三乙酯反应生成肌苷酸。生产方法1核糖核酸（RNA）水解法细胞中含有核糖核酸和脱氧核糖核酸（DNA），而RNA水解可得4种核苷酸：腺苷酸、鸟苷酸、胞苷酸和尿苷酸。其中鸟苷酸和由腺苷酸转化而来得肌苷酸是呈味物质。核苷酸有2’-、3’-和5’-核苷酸，其中只有5’-核苷酸即5’-鸟苷酸和5’-肌苷酸具有呈味性能。（1）RNA的提取。常以RNA含量较高的酵母（最为常用）和白地霉细胞（含RNA4%-11%）为原料，采用稀碱液抽提。将酵母干细胞用水配成5%-10%的悬浮液，加入氢氧化钠使其质量分数达1%；在20℃下搅拌30-45min，再用6mol/L的盐酸中和至PH=7.0，加热至90℃时保温10min，以杀灭霉菌，再冷却至2-4℃静置2-3天；取上层清液用6mol/L的盐酸调PH至2.5(RNA等电点)，在2-4℃静置过夜；过滤得RNA，并容乙醇洗涤、干燥得RNA含量60-70%的产品，产率4%-5%酵母细胞也可在6%-8%的盐酸中浸提。（2）RNA水解。在30℃下将橘青霉素ThoM的紫外线变异株N-10-14用麸皮培养5天，用90L的水提取50kg的曲，得89L含有强力核算酶P1（5’-磷酸二酯酶）的抽提液；将400mL酶液加入10L0.8%的RNA溶液中，调PH为5.6，并在65℃下反应2h，得混合核苷酸（腺苷酸0.22%、鸟苷酸0.19%和胞苷酸0.14%）。（3）核苷酸的分离。利用各种核苷酸具有不同等电的性质，用强碱性阴离子交换树脂来分离。将上述核苷酸混合液调PH至8，用国产717树脂上柱吸附，再依次用0.02mol/L甲酸、0.15mol/L甲酸、0.01mol/L甲酸+和0.1mol/L甲酸+0.1mol/L甲酸钠洗脱，分别得到胞苷酸、腺苷酸、尿苷酸和鸟苷酸。(4)从腺苷酸制备肌苷酸钠。在30℃下用麸皮培养米曲霉48h，加10倍水浸泡3h，得脱氨酶液；在腺苷酸液中加入10%的脱氨酶液，并在50-60℃和PH=6下反应3h；加热至100℃以杀酶，过滤，取清液真空浓缩、结晶得产品肌苷酸二钠。2发酵法生产5’-肌苷酸钠生产中采用的发酵法主要为葡萄糖直接发酵法，或葡萄糖家教生产肌苷，再磷酸化生成肌苷酸。（1）直接生产发酵——一步法。以葡萄糖为碳源，异变株或产氨短杆菌为生产菌，直接发酵生产肌苷酸。（2）二步法。以60-70g/L的葡萄糖为碳源，以枯草芽孢杆菌为生产菌，在30-32℃、PH=5-7下发酵80h生产肌苷；肌苷再与磷酸三乙酯反应生成肌苷酸。生产方法由酵母所得核酸分解、分离而得。淀粉糖化液(葡萄糖)经直接发酵法制得肌苷酸，作选择性羟基磷酸化，再精制中和成钠盐后结晶而得。 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